بیان گلیکوپروتئین غشایی (ha) ویروس آنفلوآنزا درe. coli نوترکیب

thesis
abstract

ویروس آنفلوآنزا که عامل مولد یکی از بیماریهای حاد تنفسی می باشد در غشا خود واجد گلیکوپروتئین مهمی به نام همآگلوتینین است. این مولکول ضمن اینکه اصلی ترین آنتی ژن برای القا پاسخ ایمنی بر علیه ویروس است، همواره به عنوان مدل ایده آلی برای مطالعه فرآیندهای بیولوژیکی مهم از جمله گلیکوزیلاسیون مورد استفاده قرار گرفته است. گلیکوزیلاسیون ( به ویژه از نوع n) متداولترین تغییر ضمن یا پس از ترجمه ای پروتئینها در سلولهای یوکاریوتی است بطوریکه تقریبا 70% داروها و واکسنهای پروتئینی از نوع n- گلیکوپروتئینها هستند. معمولا برای تولید فرم نوترکیب این پروتئینها از سیستمهای بیانی یوکاریوتی مختلف نظیرمخمرها، سلولهای پستانداران نظیر cho و سلولهای حشرات مانند sf9 استفاده می گردد که هر کدام دارای مزایا و معایب خاص خود می باشند. این سلولها با توجه به امکانات آنزیمی سیستم گلیکوزیلاسیون خود ساختارهای گلیکانی مختلفی را به مولکولهای پروتئینی می افزایند که بر عملکرد این مولکولها به ویژه آنتی ژنیسیته تاثیرگذار می باشند. بنابر این تولید گلیکوپروتئینها به فرم گلیکوزیله در باکتری اشریشیاکلی نوترکیب، که قابلیت مهندسی مسیر گلیکوزیلاسیون در آن وجود داشته باشد، از اهمیت خاصی برخوردار است. با توجه به اینکه، اهمیت گلیکوپروتئین همآگلوتینین ویروس آنفلوآنزا ( به ویژه زیر واحد بزرگ آن ha1) به عنوان آنتی ژن کلیدی برای تولید واکسن آنفلوآنزا به اثبات رسیده است، لذا در این تحقیق زیر واحد بزرگ وآنتی ژنیک مولکول همآگلوتینین(ha1) دراین اشریشیاکلی نوترکیب بیان گردید. برای این منظور ابتدا قطعه ژنی کد کننده زیر واحد بزرگ پروتئین همآگلوتینین به کمک روش reverse transcription-polymerase chain reaction از ویروس استاندارد با تیتر مناسب جداسازی وتکثیر گردید و پس از تعیین ترادف در وکتور بیانی pet22b با پپتید هدایتگر pelb کلون شد. پس ازتایید بیان پروتئین به وسیله sds-page و western blotting در لیزات سلولی و فضای پری پلاسمی، واکنش پذیری آن با آنتی سرم استاندارد ویروسی سنجیده و با آنتی ژن ویروسی استاندارد، مقایسه گردید. سپس با استفاده از سازه حامل سیستم گلیکوزیلاسیون باکتری کامپیلوباکتر ژژونی، باکتری اشریشیاکلی نوترکیب تهیه و پروتئین ha1 ویروس آنفلوآنزا در آن بیان گردید. پروتئین بیان شده در هر دو باکتری از نظر گلیکوزیلاسیون مورد ارزیابی قرار گرفت و با استفاده از روش لکتین بلاتینگ و مهار آن، گلیکوزیلاسیون ha1 درباکتری نوترکیب تایید شد.

First 15 pages

Signup for downloading 15 first pages

Already have an account?login

similar resources

بیان و خنثی‌سازی گلیکوپروتئین نوترکیب روتا ویروس میمونی((NSP4 با آنتی‌بادی اختصاصی در نوزاد موش

Background and Objectives: Rotaviruses are the most important cause of severe diarrhea in infants and young children in both developed and developing countries. Rotaviruses are members of the reoviridae family and contain 11 double- stranded RNA segments. Segment 10 encodes nonstructural glycoprotein NSP4, that can induce diarrhea in newborn mice. It has been suggested that NSP4 may be a key de...

full text

تولیدکیموزین کامل و پردازش یافته نوترکیب درE-coli و ارزیابی میزان بیان پری‌پلاسمی و فعالیت آنزیماتیک آن‌ها

سابقه و هدف: تا سال 1990، رنت (پروتئازهایی که باعث لخته شدن شیر و تولید پنیر می‌شوند) با روش قدیمی از شیردان گوساله‌های شیرخوار، یا از منابع گیاهی و یا میکروبی تهیه می‌گردید. در این سال اداره غذا و داروی آمریکا اجازه تولید و مصرف کیموزین گاوی نوترکیب تولید شده توسط باکتری‌ها را صادر کرد. امروزه بیش از 90 درصد پنیر مصرفی در انگلستان از کیموزین نوترکیب تولید می‌شود. این تحقیق به منظور قطع وابستگ...

full text

بیان اپیتوپ G1 از ژن گلیکوپروتئین G ویروس تب بی‏ دوام گاوی توسط سازه نوترکیب pET24-G1 در اشرشیاکلی

    تب بی‏دوام گاوی (BEF) یک بیماری ویروسی در گاو و گاومیش است که در سال‏های اخیر در برخی از استان‏های ایران به ویژه مناطق جنوبی و گرم دیده شده است.  گلیکوپروتئین G، آنتی‏ژن اصلی حفاظتی ویروس تب‏ بی‏دوام گاوی (BEFV) و هدف آنتی‏بادی‏های خنثی کننده ضدویروسی است.  هدف از مطالعه­ی حاضر، کلونینگ و بیان اپیتوپ G1 از ژن گلیکوپروتئین G ویروس BEF ‏در یک سیستم پروکاریوتی بود.  به این منظور، اپیتوپ G1 درو...

full text

تولیدکیموزین کامل و پردازش یافته نوترکیب درe-coli و ارزیابی میزان بیان پری پلاسمی و فعالیت آنزیماتیک آن ها

سابقه و هدف: تا سال 1990، رنت (پروتئازهایی که باعث لخته شدن شیر و تولید پنیر می شوند) با روش قدیمی از شیردان گوساله های شیرخوار، یا از منابع گیاهی و یا میکروبی تهیه می گردید. در این سال اداره غذا و داروی آمریکا اجازه تولید و مصرف کیموزین گاوی نوترکیب تولید شده توسط باکتری ها را صادر کرد. امروزه بیش از 90 درصد پنیر مصرفی در انگلستان از کیموزین نوترکیب تولید می شود. این تحقیق به منظور قطع وابستگی...

full text

همسانه سازی و بیان ژن پروتئین نوترکیب ویروس پیچیدگی برگ شلغم (tctv) در باکتری escherichia coli

چکیده ویروس پیچیدگی برگ شلغم ( turnip curly top virus, tctv) یک جمینی ویروسی جدید با ویژگی های منحصر به فرد است که در سال 1389 از ایران (فارس) گزارش شده است. مطالعه ویژگی های بیولوژیکی این ویروس، مستلزم برقراری یک روش ردیابی ویروس در طبیعت است. بدلیل کارائی بهتر روش های سرولوژیکی در شناسایی ویروس های گیاهی، در تحقیق حاضر اقدام به فراهم سازی بستری جهت تولید آنتی بادی و به تبع آن، ردیابی این ویر...

طراحی، ساخت و بیان وکتور نوترکیب ژن نوکلئوپروتیین ویروس هاری

Background: Rabies is an acute encephalitis that causes more than 60,000 deaths worldwide. The only way to save individuals bitten by a rabies-infected animal is the timely use of effective vaccines. Treatment with new generation vaccines is expensive. Therefore, there is a global movement towards the production of less expensive vaccines which retain and improve upon the quality and effectiven...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


document type: thesis

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک وزیست فناوری

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023